乳糖是兒童生長發(fā)育的主要營養(yǎng)物質之一,對青少年智力發(fā)育十分重要,特別是新生嬰兒*的,在自然界中只有哺乳類動物的奶中含有乳糖,各類植物性食物中是不含乳糖的。一分子乳糖消化可得一分子葡萄糖和一分子半乳糖。半乳糖能促進腦苷脂類和黏多糖類的生成,因而對幼兒智力發(fā)育非常重要。乳制品企業(yè)通常通過測定牛乳中半乳糖的含量來計算牛乳中乳糖的含量。
設備:
ELSD3300蒸發(fā)光散射檢測器
Agilent 1260 HPLC,C.01.07
試劑及耗材:
流動相A:超純水
流動相B:色譜純乙腈
色譜柱:Beksich糖柱,4.6*250mm,5um
(貨號:Bek445101)
柱溫箱溫度:
30C
樣品:
牛乳樣品提取物
樣品預處理:
樣品經蛋白沉淀后,0.45um濾膜過濾后取上清液待上樣
進樣體積:
20ul
按78%乙腈:22%水等梯度比例進行檢測,運行時間為20min
流動相流速:
0.9ml/min
樣品檢測:
樣品配置好后置于自動進樣器中,使用編輯好的方法進行自動進樣分析
ELSD3300蒸發(fā)光散射檢測器測定牛乳中乳糖含量
結果見表1。
表 1:乳糖定量檢測,*個峰為半乳糖
表2:半乳糖和葡萄糖分離度及拖尾因子情況
表 3:半乳糖定量曲線
R=0.99903
本次實驗的難點是樣品沒有紫外吸收,樣品水溶性強,需用乙腈稀釋,半乳糖和葡萄糖不易達到基線分離。且ELSD3300運行參數(shù)如氣體流速和檢測溫度以及增益值必須優(yōu)化。
本方法使用ELSD3300測定了牛乳中半乳糖的含量,半乳糖和葡萄糖實現(xiàn)了基線分離,ELSD3300有平衡時間短,基線噪音小,重現(xiàn)性高和線性好等特點。
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